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细菌内毒素检测是如何工作的?
1、内毒素测定主要依据浊度法和显色基质法的原理进行。浊度法是通过检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的浊度变化来测定内毒素含量。具体分为终点浊度法和动态浊度法,但前者尚未商业化,后者则是测量反应混合物达到预设吸光度所需的时间或浊度上升速率。
2、确保所有试剂(如鲎试剂、内毒素工作标准品、LAL溶解缓冲液、LAL试剂检查用水)均在有效期内,并符合试验要求。准备所需的器具,包括玻璃稀释管、独立包装的血清吸管、标签、96-微孔板、试剂槽等,并确保这些器具已经过内毒素试验验证合格且无热原。
3、细菌内毒素检测主要包括以下方法及其操作:兔热原试验 方法:通过将待测样品注射到多只兔子体内,观察是否引发发热反应。操作:此过程涉及动物试验,因此操作较为复杂且有一定的伦理争议。目前,RPT正逐渐被其他更现代的方法所取代。
4、内毒素检测(凝胶法)是一种用于革兰氏阴性细菌内毒素的限量测试方法。其原理基于内毒素能够催化鲎试剂(LAL)中的酶原活化。初始活化速率由内毒素的浓度决定。活化后的酶(凝固酶)会水解LAL中的凝血蛋白(凝固原)内的特定化合键,产生凝固素。这些凝固素自行联合,形成凝胶状胶块。
5、细菌内毒素的检测方法主要包括以下几种:凝胶法 凝胶法主要用于内毒素的定性和半定量检测。此方法虽被视为内毒素检测的标准方法,但其检测范围存在一定的局限性,并且对检测用水和检测条件均有特定的要求。
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